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日期:2024-09-09瀏覽:260次
細胞培養(yǎng)技術作為現(xiàn)代生物醫(yī)學研究的重要手段,?在生命科學、?醫(yī)學研究、?生物制藥等領域發(fā)揮著不可替代的作用。?滬鼎生物帶你了解細胞培養(yǎng)的基本概念、?常用方法及注意事項。?
一、?細胞培養(yǎng)的基本概念
細胞培養(yǎng)技術是指從生物體內取出組織或細胞,?在體外模擬體內生理環(huán)境,?在無菌、?適當溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下,?使細胞生長繁殖并維持其結構和功能的一種重要技術。細胞培養(yǎng)技術主要包括細胞培養(yǎng)的類型、?培養(yǎng)基、?細胞的消耗物質、?細胞培養(yǎng)的設備和細胞培養(yǎng)的步驟等幾個方面。
1. 細胞培養(yǎng)的類型
??原代細胞培養(yǎng)?:?直接從體組織中分離出來的生物細胞進行培養(yǎng)。?這種方法繁瑣且細胞數量和品質難以保證,?因此在實驗室中較少使用。?
?繼代細胞培養(yǎng)?:?從已經培養(yǎng)的細胞中分離出來的細胞進行培養(yǎng),?是實驗室常用的方法。
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2. 培養(yǎng)基
培養(yǎng)基是提供細胞分裂和生長所需營養(yǎng)物質的重要物質,?通常由肝素、?胰島素和細胞因子等多種化合物構成,?以滿足不同類型細胞對營養(yǎng)物質的需求。?
3. 細胞的消耗物質
細胞培養(yǎng)期間需要提供多種物質,?包括抗生素(?防止感染)?、?氣體(?氧氣和二氧化碳保證正常生長)?、?酸堿指示劑(?檢測培養(yǎng)基的酸堿度)?等。?
4. 細胞培養(yǎng)設備
細胞培養(yǎng)常用的設備包括培養(yǎng)箱(?控制溫度、?濕度和氧氣)?、?顯微鏡(?觀察細胞形態(tài)和生長情況)?、?細胞培養(yǎng)板(?培養(yǎng)細胞和收集細胞)?等。?
二、?細胞培養(yǎng)的常用方法
1. 細胞傳代
細胞傳代是將健康細胞從舊培養(yǎng)基中轉移到新培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖的過程。
?具體步驟:?
?貼壁細胞?:?吸盡舊培養(yǎng)基,?PBS清洗去除血清和死細胞,?加入消化液消化細胞,?待細胞收縮變圓或脫落后,?加入全部培養(yǎng)基輕輕吹打,?使細胞成單個懸浮,?離心后重懸于新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。?
?懸浮細胞?:?可直接將細胞原液分置新培養(yǎng)瓶中,?加入全部培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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2. 細胞復蘇
細胞復蘇是將凍存的細胞快速解凍并置于新培養(yǎng)基中培養(yǎng)的過程。
?具體步驟:?
準備適宜的培養(yǎng)基和血清。?
將凍存管迅速放入37℃水浴中搖動至融化。?
在無菌條件下,?將細胞懸液轉移到含有全部培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,?輕輕搖晃后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。?
1.?無菌操作?:?無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件,?必須確保無菌工作區(qū)域、?良好的個人衛(wèi)生、?無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。?
2.?適宜的培養(yǎng)條件?:?包括溫度(?一般為37℃)?、?pH值(?7.2~7.4)?、?滲透壓(?260~320mmol/L)?等,?這些條件對細胞的生長至關重要。?
3.?合適的培養(yǎng)基和血清?:?培養(yǎng)基和血清的種類和比例應根據細胞類型和實驗目的進行選擇。?
4.?定期觀察和記錄?:?定期觀察細胞生長情況,?記錄細胞形態(tài)、?密度和生長速度等指標,?以便及時調整培養(yǎng)條件。?
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